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Biologia · Glossário

O que é Desnaturação, temperatura de fusão?

Também chamado de: desnaturação (DNA) · temperatura de fusão · hibridização

Definição 11.9 Biologia universitária — 1.º ano · Capítulo 11 — Nucleotídeos e ácidos nucleicos

O aquecimento, ou um pH extremo, separa as duas fitas do DNA: é a desnaturação (fusão), uma transição cooperativa ao longo de poucos graus, cujo ponto médio é a temperatura de fusão TmT_m. Ela é acompanhada do efeito hipercrômico: as fitas simples absorvem cerca de 40 %40\,\% mais luz ultravioleta a 260 nm260\,\mathrm{nm} que as mesmas bases empilhadas numa hélice. O TmT_m sobe com o teor de G+CG + C (0.4 ∘C0.4\,{}^{\circ}\mathrm{C} por ponto percentual), com a concentração de sal e com o comprimento; em sal a 0.15 mol/L0.15\,\mathrm{mol}/\mathrm{L}, um DNA longo com 50 %50\,\% de G+CG + C funde perto de 90 ∘C90\,{}^{\circ}\mathrm{C}. Resfriadas devagar, as fitas encontram as complementares e refazem a hélice: é a renaturação, ou hibridização quando as fitas vêm de fontes diferentes.

Curvas de fusão de dois DNAs no mesmo sal. A absorbância sobe 40\,\% à medida que as fitas se separam, ao longo de poucos graus; o ponto médio, T_m, é maior para o DNA mais rico em pares G–C.
Curvas de fusão de dois DNAs no mesmo sal. A absorbância sobe 40 %40\,\% à medida que as fitas se separam, ao longo de poucos graus; o ponto médio, TmT_m, é maior para o DNA mais rico em pares G–C.
DNA precipitado por etanol gelado a partir de um lisado celular e enrolado num bastão de vidro: alguns miligramas da molécula, visíveis como fibras porque cada uma tem milhões de pares de bases de comprimento.
DNA precipitado por etanol gelado a partir de um lisado celular e enrolado num bastão de vidro: alguns miligramas da molécula, visíveis como fibras porque cada uma tem milhões de pares de bases de comprimento.

Exemplos

Exemplo 11.11 (Uma sonda encontra um gene)

Uma sonda de vinte nucleotídeos complementar a um gene, a 5 ∘C5\,{}^{\circ}\mathrm{C} abaixo do TmT_m dela, liga-se à complementar exata dela e a mais nada em três bilhões de pares de bases: um único descasamento em vinte baixa o TmT_m em vários graus e o híbrido descasado funde. A especificidade do pareamento de bases, multiplicada por vinte posições, é aquilo em que se apoia todo teste de DNA, do exame de paternidade à detecção de patógenos.

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