Biologia · Glossário

O que é Enzimas de restrição, ligase e vetores?

Definição 6.1 Biologia universitária — 3.º ano · Capítulo 6 — Engenharia genética e biotecnologia

Uma enzima de restrição do tipo II é uma endonuclease bacteriana que corta o DNA de fita dupla numa sequência específica de 4 a 84\text{ a }8 pares de bases, em geral um palíndromo: a EcoRI corta G^{\downarrow}AATTC, deixando saliências de fita simples de quatro bases (extremidades coesivas) complementares a qualquer outra extremidade EcoRI; outras enzimas deixam extremidades cegas. A DNA-ligase sela dois fragmentos cujas extremidades se encaixam. Um vetor é uma molécula de DNA que se replica num hospedeiro e pode carregar um fragmento inserido: um plasmídeo de algumas quilobases com uma origem de replicação, um marcador de seleção (um gene de resistência a antibiótico, de modo que só as células que receberam o plasmídeo crescem no antibiótico) e um agrupamento de sítios de restrição únicos para o inserto; o bacteriófago λ\lambda, cosmídeos e cromossomos artificiais de bactéria ou de levedura para insertos de 20 a 1000kb20\text{ a }1000\,\mathrm{kb}. O DNA entra numa bactéria por transformação, depois de um choque químico ou elétrico que torna a membrana transitoriamente permeável, com eficiência de 10610^{6} a 10910^{9} transformantes por micrograma de plasmídeo. Uma molécula recombinante é a que une DNA de duas fontes.

Um vetor de clonagem e sua química. O plasmídeo carrega uma origem, um marcador de seleção e um sítio de restrição único ao qual se liga um fragmento cortado pela mesma enzima; as extremidades coesivas tornam compatíveis dois fragmentos quaisquer cortados pela mesma enzima.
Um vetor de clonagem e sua química. O plasmídeo carrega uma origem, um marcador de seleção e um sítio de restrição único ao qual se liga um fragmento cortado pela mesma enzima; as extremidades coesivas tornam compatíveis dois fragmentos quaisquer cortados pela mesma enzima.
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