Biologie · Glossaire

Qu'est-ce que « Enzymes de restriction, ligase et vecteurs » ?

Définition 6.1 Biologie universitaire — 3e année · Chapitre 6 — Génie génétique et biotechnologies

Une enzyme de restriction de type II est une endonucléase bactérienne qui coupe l’ADN double brin à une séquence précise de 4 aˋ 84\text{ à }8 paires de bases, le plus souvent palindromique : EcoRI coupe G^{\downarrow}AATTC, laissant des extrémités simple brin sortantes de quatre bases (des extrémités cohésives) complémentaires de toute autre extrémité EcoRI ; d’autres enzymes laissent des extrémités franches. L’ADN ligase scelle deux fragments dont les extrémités s’ajustent. Un vecteur est une molécule d’ADN qui se réplique dans un hôte et peut porter un fragment inséré : un plasmide de quelques kilobases muni d’une origine de réplication, d’un marqueur de sélection (un gène de résistance à un antibiotique, de sorte que seules les cellules ayant capté le plasmide poussent sur l’antibiotique) et d’un groupe de sites de restriction uniques pour l’insert ; le bactériophage λ\lambda, les cosmides, et les chromosomes artificiels bactériens ou de levure pour des inserts de 20 aˋ 1000kb20\text{ à }1000\,\mathrm{kb}. L’ADN entre dans une bactérie par transformation, après un choc chimique ou électrique qui rend la membrane transitoirement perméable, avec une efficacité de 10610^{6} à 10910^{9} transformants par microgramme de plasmide. Une molécule recombinante est une molécule qui réunit de l’ADN de deux provenances.

Un vecteur de clonage et sa chimie. Le plasmide porte une origine, un marqueur de sélection et un site de restriction unique dans lequel on ligature un fragment coupé par la même enzyme ; les extrémités cohésives rendent compatibles deux fragments quelconques coupés par la même enzyme.
Un vecteur de clonage et sa chimie. Le plasmide porte une origine, un marqueur de sélection et un site de restriction unique dans lequel on ligature un fragment coupé par la même enzyme ; les extrémités cohésives rendent compatibles deux fragments quelconques coupés par la même enzyme.
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