Une enzyme de restriction de type II est une endonucléase bactérienne qui coupe l’ADN double brin à une séquence précise de paires de bases, le plus souvent palindromique : EcoRI coupe GAATTC, laissant des extrémités simple brin sortantes de quatre bases (des extrémités cohésives) complémentaires de toute autre extrémité EcoRI ; d’autres enzymes laissent des extrémités franches. L’ADN ligase scelle deux fragments dont les extrémités s’ajustent. Un vecteur est une molécule d’ADN qui se réplique dans un hôte et peut porter un fragment inséré : un plasmide de quelques kilobases muni d’une origine de réplication, d’un marqueur de sélection (un gène de résistance à un antibiotique, de sorte que seules les cellules ayant capté le plasmide poussent sur l’antibiotique) et d’un groupe de sites de restriction uniques pour l’insert ; le bactériophage , les cosmides, et les chromosomes artificiels bactériens ou de levure pour des inserts de . L’ADN entre dans une bactérie par transformation, après un choc chimique ou électrique qui rend la membrane transitoirement perméable, avec une efficacité de à transformants par microgramme de plasmide. Une molécule recombinante est une molécule qui réunit de l’ADN de deux provenances.
Biologie · Glossaire