Biología · Glosario

¿Qué es Enzimas de restricción, ligasa y vectores?

Definición 6.1 Biología universitaria — tercer año · Capítulo 6 — Ingeniería genética y biotecnología

Una enzima de restricción de tipo II es una endonucleasa bacteriana que corta el ADN de doble hebra en una secuencia concreta de 4 a 84\text{ a }8 pares de bases, casi siempre un palíndromo: EcoRI corta G^{\downarrow}AATTC y deja salientes de hebra sencilla de cuatro bases (extremos cohesivos) complementarios de cualquier otro extremo EcoRI; otras enzimas dejan extremos romos. La ADN-ligasa sella dos fragmentos cuyos extremos encajan. Un vector es una molécula de ADN que se replica en un hospedador y puede llevar un fragmento insertado: un plásmido de unas pocas kilobases con un origen de replicación, un marcador de selección (un gen de resistencia a un antibiótico, de modo que solo crecen en el antibiótico las células que tomaron el plásmido) y un grupo de sitios de restricción únicos para el inserto; el bacteriófago λ\lambda, los cósmidos y los cromosomas artificiales bacterianos o de levadura para insertos de 20 a 1000kb20\text{ a }1000\,\mathrm{kb}. El ADN entra en una bacteria por transformación, tras un choque químico o eléctrico que hace la membrana transitoriamente permeable, con una eficiencia de 10610^{6} a 10910^{9} transformantes por microgramo de plásmido. Una molécula recombinante es la que une ADN de dos procedencias.

Un vector de clonación y su química. El plásmido lleva un origen, un marcador de selección y un sitio de restricción único en el que se liga un fragmento cortado con la misma enzima; los extremos cohesivos hacen compatibles dos fragmentos cualesquiera cortados por la misma enzima.
Un vector de clonación y su química. El plásmido lleva un origen, un marcador de selección y un sitio de restricción único en el que se liga un fragmento cortado con la misma enzima; los extremos cohesivos hacen compatibles dos fragmentos cualesquiera cortados por la misma enzima.
Leer en el capítulo →