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Biología · Glosario

¿Qué es Secuenciación por terminación de cadena?

Definición 4.1 Biología universitaria — tercer año · Capítulo 4 — Genómica y secuenciación

La secuenciación de Sanger copia un molde de hebra sencilla a partir de un cebador con ADN-polimerasa en presencia de los cuatro nucleótidos normales y de una pequeña proporción de didesoxinucleótidos, que carecen del hidroxilo 3′' y terminan por tanto la cadena allí donde se incorporan. Cada didesoxinucleótido lleva un fluoróforo distinto. El producto es una mezcla de fragmentos, uno por cada posición del molde, y cada uno acaba en una base de identidad conocida; separados por tamaño en un capilar de gel, pasan por un detector en orden de longitud, y la secuencia de colores es la secuencia del molde. Una carrera lee 700 a 900 bp700\text{ a }900\,\mathrm{bp} con una tasa de error por debajo de 10−310^{-3}; sigue siendo el método para verificar una construcción o un solo gen.

Izquierda: Frederick Sanger, que ideó los primeros métodos prácticos para leer proteínas y ADN y recibió un premio Nobel por cada uno. Derecha: una autorradiografía de un gel de secuenciación de la era anterior al capilar, con una calle por base y la secuencia leída de abajo arriba en la escalera de bandas. Izquierda: Frederick Sanger, que ideó los primeros métodos prácticos para leer proteínas y ADN y recibió un premio Nobel por cada uno. Derecha: una autorradiografía de un gel de secuenciación de la era anterior al capilar, con una calle por base y la secuencia leída de abajo arriba en la escalera de bandas.
Izquierda: Frederick Sanger, que ideó los primeros métodos prácticos para leer proteínas y ADN y recibió un premio Nobel por cada uno. Derecha: una autorradiografía de un gel de secuenciación de la era anterior al capilar, con una calle por base y la secuencia leída de abajo arriba en la escalera de bandas.
La secuenciación por terminación de cadena. Una base didesoxi termina la copia en cada posición donde se incorpora; los fragmentos, uno por longitud, se separan por tamaño y el color de cada base terminal se lee en orden.
La secuenciación por terminación de cadena. Una base didesoxi termina la copia en cada posición donde se incorpora; los fragmentos, uno por longitud, se separan por tamaño y el color de cada base terminal se lee en orden.
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