A RNA-polimerase sintetiza RNA sobre um molde de DNA, de , a partir dos quatro ribonucleosídeos trifosfatados, sem iniciador. Ela começa num promotor, uma sequência logo a montante do gene que ela reconhece e à qual se liga; nas bactérias uma subunidade chamada (sigma) faz o reconhecimento, em dois trechos conservados dez e trinta e cinco pares antes do início. A enzima abre cerca de quinze pares da hélice numa bolha de transcrição, copia a fita molde (lida de ) num RNA idêntico em sequência à outra fita, a codificante, e avança a cerca de cinquenta nucleotídeos por segundo, refechando a hélice atrás de si; o RNA se desprende à medida que é feito. Ela para num terminador: nas bactérias, uma sequência autocomplementar cujo RNA se dobra num grampo que solta o transcrito. Muitas polimerases podem se seguir umas às outras ao longo de um gene, de modo que um transcrito pode ser iniciado a cada segundo.
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