El piruvato entra en la mitocondria y el complejo de la piruvato deshidrogenasa lo oxida a acetil-CoA — un grupo acetilo de dos carbonos transportado por la coenzima A (Capítulo 11) en un enlace tioéster rico en energía —, con liberación de un y un NADH. El acetil-CoA es la entrada común de todos los combustibles al ciclo: los glúcidos por el piruvato, las grasas por la -oxidación y muchos aminoácidos directamente.
Ejemplos
Ejemplo 15.7 (Seguir los carbonos)
Dese a una célula glucosa marcada con en el carbono 1: la marca aparece en el carbono metilo del piruvato, después en el del acetil-CoA, entra en el citrato y sale como solo en la segunda o la tercera vuelta del ciclo, pues los dos carbonos liberados en una vuelta dada pertenecen al oxalacetato de la anterior. Krebs (1937) dedujo el ciclo de la observación de que cantidades catalíticas de cualquiera de sus ácidos estimulaban la oxidación de mucho más piruvato del que ellos mismos podían justificar: se estaban regenerando.